Es una nueva "noche" y un nuevo "museo" para Larry Daley nuevamente reunido con otras estrellas de la primera película. La película logra darle vida al Smithsonian Institution, que alberga el complejo de museos de mayor tamaño y sus colecciones cuentan con más de 136 millones de objetos que van desde el avión que Amelia Earhart voló a solas en su travesía transatlántica y la hoja criminal de Al Capone y su foto de ficha judicial, las zapatillas escarlatas que calzo Dorothy en la película el Mago de Oz y la poltrona de Archie Bunker. Ninguna película para gran público había sido filmada dentro del Smithsonian de Washington hasta ahora.